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土层细菌隔离品系消毒活性探讨

2012-08-22 02:43:17中国绿化招标网

  放线菌的分离按照王黎明等的方法进行[1],0.2mL液体接种于重铬酸钾浓度为100mg/L的高氏一号培养基平板上,挑取具有放线菌形态的菌落进行划线分离。

  指示菌平板的制备细菌在牛肉膏蛋白胨液体培养基内37℃、160r/min振荡培养1d,霉菌在PDA液体培养基内28℃、160r/min培养3d,然后取0.1mL菌液接于对应的平板上,用涂布耙涂匀;1.2.2.2抗菌实验用5mm无菌打孔器切取GYM培养基上生长良好的分离菌的菌块,用接种环挑取于指示菌平板上。细菌指示平板37℃培养1d,霉菌指示平板28℃培养3d,观察抑菌圈并测量其大小。部分分离菌株的鉴定对抗菌谱较广的菌株进行鉴定。

  16SrRNA基因序列测定和分析(1)总DNA模板的提取:参考Kim[4]报道的方法进行总DNA模板的提取;(2)16SrRNA基因的PCR扩增:16SrRNA基因扩增用引物为通用引物(Lane,1991)[5],正向引物为27f,反向引物为1492r.引物的序列如下:27f(对应于E.coli8 ̄27位碱基):5‘-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’;1492r(对应于E.coli1492 ̄1514位碱基):5‘-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’。16SrDNA扩增参照Chun报道的方法[6]进行。

  (3)16SrRNA基因序列的测定:序列测定委托上海生工完成;(4)16SrRNA基因序列分析将所测得的16SrRNA基因序列与GenBank/EMBL/DDBJ数据库中的已有序列比较,进一步确定菌株的分类地位。

  分离结果从3个不同程序的土壤处理所得到的土壤悬液共得到36个分离菌株。由于在培养基内加入了抑制剂,细菌和真菌的生长受到了抑制,而放线菌的生长不会受到抑制,因此对放线菌的分离不会造成影响。

  由表1可见,分离菌株中对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黑根霉和黑曲霉有抑制作用的菌株较多,而对大肠杆菌有抑制作用的菌株较少;对金黄色葡萄球菌有抑制作用的菌株基本上都对枯草芽孢杆菌有抑制作用,对枯草芽孢杆菌有抑制作用的菌株基本上都对金黄色葡萄球菌也有抑制作用;分离菌株3-2对所使用的五种指示菌的生长均有拮抗作用。

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